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    超凈工作臺在胡蘿卜愈傷組織建立實驗中的應用
    發布時間:2011-12-27 08:52:56   瀏覽:5459

    超凈工作臺在胡蘿卜愈傷組織建立實驗中的應用

    一、 材料和設備

    超凈工作臺或者無菌接種室

    培養基 N6+2 mg/L 2,4-D

    帶有吸水紙的成套的培養皿,無菌水

    解剖刀、槍型鑷子、刀片

    無病蟲的胡蘿卜直根數十個

    消毒劑 0.2%的升汞溶液

    70%酒精、95%酒精及70%的酒精棉球

    l000毫升的玻璃燒杯數個、酒精燈、火柴、記號筆、小刷子(可用一次性牙刷)

    二、實驗材料 新鮮胡蘿卜、胡蘿卜愈傷組織

    三、實驗步驟'

    1 選擇無傷、無病、形狀較規則的胡蘿卜,用小刷子在流動的自來水下洗刷胡蘿卜,除凈表面所有的泥屑??梢愿鶕嶒灥臅r期,選用其它的實驗材料。

    2 將胡蘿卜切成大約 40 mm厚的片段,放入100或500 ml的燒杯中,倒入消毒液,將植物材料覆蓋、浸泡10-30 min。在滅菌過程中,在每個材料上做好標記,并對應地放在預接種的培養基邊上。接種后在培養瓶上標明培養物名稱和培養日期。

    3 在超凈工作臺上,倒掉消毒液,用無菌水沖洗3-5次,以便去除殘留的消毒液。

    4 取消毒過的胡蘿卜放入已滅菌的帶有濾紙的培養皿中,用無菌解剖刀從兩端各切去10毫米,再將留下的胡蘿卜直根切成一系列一毫米厚的橫切片。取其中的一片轉到另一個已滅菌的帶有吸水紙的培養皿中,再將每一片切成小塊,使其每個小塊上均包含木質部、形成層和韌皮部,外植體的大小要盡量一致。

    5 接種 取下培養瓶的塞子(或錫鉑紙),用火灼燒瓶口2 cm處,手持培養瓶呈45º角,用消毒鑷子把4-8塊外植體轉到瓊脂培養基的表面,注意把靠近根尖的一面接觸培養基。然后立即將燒過的封口棉塞或錫鉑紙封住瓶口。每兩次轉移之間都要用酒精燈灼燒鑷子,防止帶菌。

    6 培養 接種好的外植體在25℃的培養箱中,黑暗條件下培養四周左右就會形成一塊較大的愈傷組織。

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